常见病原菌的灭菌抑菌保藏原理及方法

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  1、常见病原菌的灭菌、抑菌、保藏原理及方法消毒灭菌 基本概念消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中的病原微 生物,并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。 灭菌（sterilization）：杀死 物体上所有微生物的方法(包括芽孢)。 一、消毒灭菌的方法常用的消毒和灭菌方法可分为：1）物理方法：热力灭菌法辐射杀菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法2）化学方法3）生物灭菌法热力灭菌 原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽链断裂，蛋白质 变性凝固，核酸解链崩解, 导致细菌死亡。 火焰灼烧 干热灭菌法 烘箱热空气灭菌 LIH法高温灭菌 巴氏消毒 HTST法 常压 下 煮沸消毒 间歇灭菌 湿热灭菌

  2、消毒法 常规加压灭菌 加压 连续加压灭菌法 种类： 常用热力灭菌法种类方法效果用途干热焚烧用焚烧炉燃烧灭菌废弃污物、尸体烧灼火焰烧灼灭菌接种环，试管口干烤红外线h电磁波热效应灭菌灭菌玻璃器皿等耐高温的物品医疗器械湿热煮沸法100C，5-10分钟，沸水消毒饮水和食具高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌器103.4Kpa121.3C15-20分钟灭菌耐高温耐湿物品 辐射杀菌法 紫外线（ ultraviolet ray,UV) : 260nm-266nm（最佳杀菌波长） 杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成 二聚 体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡 特点： 穿

  3、透力弱 适合使用的范围：适于空气和物体表面消毒滤过除菌法（filtration） 机理：用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去, 以达到除菌目的 器具：滤菌器（filter） 适用物品：不耐高温物品（血清、毒素、抗生素）以及 空气等的除菌 低温抑菌法在低温状态下真空抽去水分在低温状态下真空抽去水分冷冻真空干燥法：冷冻真空干燥法：用途：保存菌种干燥与（二）化学消毒灭菌法消毒剂杀菌机理：1.使菌体蛋白变性和凝固 ： 酚、醇、酸硷、醛类，重金属盐类（高浓度） 2 .干扰细菌的酶系统（酶失活）： 氧化剂、重金属盐类（低浓度） 3. 损伤细菌细胞膜 酚类（低浓度）、表面活性剂 杀菌或抑菌，并无绝对界限，常常

  4、不易区分。同一物质，浓度高时可杀菌，而浓度低时只能抑菌，作用时间长可杀菌，作用时间短则只能抑菌。另外，由于各种微生物性质的不同，同一物质对一种微生物具有杀菌作用，而对另一种微生物可能仅有抑菌作用。 抑菌 采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。防腐 利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，即通过制菌作用防止食品、生物制品等对象发生霉腐的措施化疗 指利用具有高度选择毒力，即对病原菌具高度毒力而对其宿主基本无毒的化学物质来抑制主体内病原微生物的生长繁殖，借以达到治疗该宿主传染病的一种措施抑菌的方法 1、低温 2、缺氧 3、干燥 4、高渗 5、高酸度 6、高醇度 7、加防腐剂抑

  5、菌的原理 1、低温低温：利用4以下的各种低温（0， -20，-70，-196等）保藏食物等 2、缺氧缺氧：采用抽真空、冲氮或二氧化碳、加除氧剂等方法来有很大效果预防食品和粮食等的霉腐、变质而达到保鲜的目的 3、干燥干燥：采用晒干、烘干或红外线干燥等方法对粮食、食品等进行干燥保藏 在密封条件下，也用生石灰，无水氯化钙干燥抑菌的原理 4、高渗高渗：通过盐腌和糖渍等高渗措施来保护食物，是在民间早就流传的有效防霉腐方法。 5、高酸度高酸度：在我国具有悠久历史的泡菜，是利用乳酸菌的厌氧发酵使新鲜蔬菜产生大量乳酸，借这种高酸度而达到抑制杂菌和防霉腐的目的。 6、高纯度高纯度：用白酒或黄酒保存食品，在我国有悠久

  6、传统，如醉蟹、醉麸、醉笋和黄泥螺等产品，都是特色风味食品。 7、加防腐剂加防腐剂：有些食品、调味剂、饮料、果汁或工业器材中，可加入可加入适量的防腐剂或防霉剂来达到防霉腐的目的，如丙酸（0.32%）或乙二酸（0.32%）来做面包等的防腐剂。化学因素 1、表面消毒剂：随浓度递增相继出现制菌和杀菌作用，形成一个连续的作用谱 2、磺胺类药物：抗代谢 3、抗生素：在低浓度能抑制和干扰他种生物的生命活动杀菌杀菌抑菌抑菌含义消毒剂对微生物的杀灭能力生物制剂抑制妨碍细菌生长繁殖及活性的能力作用时间杀菌时间可为2min、5min、10min、20min相同条件下作用时间越短，杀菌率越低，所以最终选择最短的作用时间来

  7、检测杀菌性能更有代表性抑菌时间可为2min、5min、10min、20min相同条件下作用时间越长，杀菌率越低，所以最终选择最长的作用时间来检测抑菌性能更有代表性残留消残留消毒剂的毒剂的去除方去除方法不同法不同中和剂法（化学中和剂法（化学中合法）中合法）稀释法（酸碱平衡稀释法（酸碱平衡法）法）评价标准杀菌率90%，产品有杀菌作用。抑菌率50%90%，产品有抑菌作用，抑菌率90%产品有较强的抑菌作用杀菌杀菌抑菌抑菌菌种保藏根本原则1、保藏菌种时首先要选择它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等，并创造一个低温、干燥、缺氧、避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能较长时间维持其休眠状态。2、对于不产孢子的

  8、微生物，也要使其新陈代谢处于最低水平，又不会死亡，进而达到长期保藏的目的。常用菌种保藏方法1 常用的简易保藏法：斜面传代保藏法、半固体穿刺保藏法（适用于细菌和酵母菌）、石蜡油封法2 甘油保藏法3 干燥保藏法4 线 简易保藏法基础原理：利用低温来抑制微生物生命活动。通常将在斜面或半固体培养基上生长良好时培养物直接放到210 冰箱中保藏，当培养基营养的东西消耗殆尽后再重新移植到新的 培养基上，故又称定期移植保藏法或传代培养保藏法。1 简易保藏法 定期移植时间间隔： 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； 放线个月； 石蜡油封法一般可保藏1年。

  9、 优缺点：简单易操作，可随时观察菌种生长状况，但较费时费力，因经常移植传代，微生物物易发生变异。1 简易保藏法 定期移植时间间隔： 一般不产芽孢的细菌约2周至1个月； 放线个月； 石蜡油封法一般可保藏1年。 优缺点：简单易操作，可随时观察菌种生长状况，但较费时费力，因经常移植传代，微生物物易发生变异。1.1斜面传代保藏法 贴标签：菌种 菌株 接种日期 接种：对数生长期后期 成熟的孢子 培养： 细菌37，1824h 酵母2830 ，3660h 放线d 收藏：管口面塞用牛皮纸包扎，或用融化的固体石蜡封棉塞后置4冰箱保存。1.2半固体穿刺保藏法 贴标签 穿

  10、刺接种：将菌种直刺入直立柱中央 培养：同传代保藏法 收藏：待菌长好后，用浸有石蜡的无菌软木塞或橡皮塞代替面塞并塞紧，置4 冰箱中保藏，保藏0.51年。1.3石蜡油封法 石蜡油灭菌：将石蜡油装入三角瓶中，装量不超过总体积的1/3，塞上面塞，外包牛皮纸，加压蒸汽灭菌（121 ，30min），连续灭菌2次。然后在40 温箱中放置2周或置105110 烘箱中烘2h，除去石蜡油中的水分。 培养 加石蜡油：以无菌吸管吸石蜡油加至菌种管中，加入量以高出斜面顶端或直立柱培养基表面约1cm为宜。 收藏：面塞外包牛皮纸或用无菌橡皮塞，把菌种管直立放置于4 冰箱中。 放线菌、霉菌及产芽孢细菌一般可保2年，酵母菌及不

  11、产芽孢细菌可保1年。2 甘油保藏法 期长，保存期间取样测试方便，在基因工程中常用于保存含质粒的菌株，一般可保35年。保护剂： 40%左右的甘油 机理：适当浓度甘油中，少量甘油分子进入细胞，使菌种细胞在冷冻过程中缓解了其由于强烈脱水及胞内形成冰晶而引起的破坏。 保藏温度：-20 左右或-70 特点:简单易操作，保藏2 甘油保藏法 方法步骤： 无菌甘油的制备：80%的甘油在121灭菌20min 保藏培养物的制备：活化 纯化 性能检验测试 制备菌种培养物 保藏菌悬液的制备：液体法 菌苔法 -20 保藏 快速冷冻；乙醇-干冰 液氮 超低温保藏：-70 一般细菌、酵母保存期为35年。3 干燥保藏法 基本原理：

  12、将微生物赖以生存的水分蒸发掉，使细胞处于休眠和代谢停滞状态，进而达到较长期保藏的目的。低温条件下，保藏期可达数年至十几年之久。 砂土管保藏法、明胶片保藏法、硅胶保藏法、麸皮保藏法 砂土管保藏法产生芽孢的细菌及形成孢子的霉菌和放线菌。 方法：处理砂土 装沙土管 制备菌液 加孢子液 干燥 收藏 恢复培养 明胶片保藏法细菌 制备菌悬液 制备菌液 制备蜡纸 加菌液 干燥 收藏 恢复培养3干燥保藏法 硅胶保藏法丝状真菌。 方法：制备硅胶 制备菌液 加菌液 干燥 收藏 恢复培养 麸皮保藏法产孢子的丝状真菌。 制备麸皮培养基 培养菌种 干燥 收藏 恢复培养3干燥保藏法4冷冻真空干燥保藏法 该法集中了菌种保藏

  13、中低温、缺氧、干燥和添加保护剂等多种有利条件，是微生物代谢处于相对静止状态。 该法可同时用于细菌、放线菌、丝状真菌、（除少数不产孢子或只产生丝状体真菌外）、酵母菌及病毒的保藏。 该方法保藏菌种范围广、保藏时间长（一般可达1020年），存活率高，是目前最有效的菌种保藏方法之一。4冷冻线液氮超低温保藏法 将菌种保藏在超低温（-196-150 ）的液氮中，可降低变异率和长期保持原种的性状。 对于冷冻干燥保藏法或其他干燥保藏有困难的微生物，如支原体、衣原体及难以形成孢子的小霉小型藻类或原生动物都可用本法长期保存，这是当前保藏菌种最理想的方法。 保护剂：20%甘油或10%二甲基亚砜（DMSO）

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